在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中，顯色與比色是萬萬不可疏忽的一個(gè)方面。在本月初時(shí)，研域(上海)化學(xué)試劑有限公司技術(shù)專員特別為2018年試劑盒的運(yùn)用做出了總結(jié)與剖析。今天咱們首要針對(duì)ELISA顯示與比色，一同來看本年度ELISA試劑盒年底材料總結(jié)大放送。
ELISA經(jīng)過顯色反響，在酶標(biāo)儀上測(cè)定吸光度，與規(guī)范曲線比較得出可溶性蛋白總量。ELISPOT也是經(jīng)過顯色反響，在細(xì)胞排泄這種可溶性蛋白的相應(yīng)方位上閃現(xiàn)明晰可辨的斑駁，可直接在顯微鏡下人工計(jì)數(shù)斑駁或經(jīng)過核算機(jī)輔佐的剖析系統(tǒng)對(duì)斑駁進(jìn)行計(jì)數(shù)，1個(gè)斑駁代表1個(gè)細(xì)胞，然后核算出排泄該蛋白的細(xì)胞的頻率。由于是單細(xì)胞水平檢測(cè)，ELISPOT比ELISA更活絡(luò)，能從20萬-30萬細(xì)胞中檢出1個(gè)排泄該蛋白的細(xì)胞。捕獲抗體具有高親和力、高特異性、低內(nèi)毒素的單抗，在研究者以刺激劑激活細(xì)胞時(shí)，不會(huì)影響活化細(xì)胞排泄細(xì)胞因子。   
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體，ELISA試劑盒然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗(yàn)，需先將板置于規(guī)范96孔的座架中，才可進(jìn)行比色。在加底物液顯色前，先將軟板邊際剪凈，這樣，此板就可*平妥坐入座架中。比色時(shí)應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn)，測(cè)讀底物孔和空白孔，以記載本次試驗(yàn)的試劑情況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點(diǎn)，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度，然后進(jìn)行核算。
比色成果的表達(dá)以往通用光密度，現(xiàn)按規(guī)則用吸光度，兩者意義相同。一般的表明辦法是，將吸收波長寫于A字母的右下角。
相關(guān)問題剖析：
1. 酶結(jié)合物的稀釋液
在稀釋液中常參加高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)，ELISA試劑盒經(jīng)過競(jìng)賽按捺酶結(jié)合物在固相載體上的非特異性吸附。一般還參加可以按捺蛋白質(zhì)吸附于塑料外表的非離子型外表活性劑。
2. 正確稀釋酶結(jié)合物 
酶結(jié)合物的合適作業(yè)濃度需求經(jīng)過預(yù)試驗(yàn)來確定，濃度過高易導(dǎo)致本底偏高，濃度過低則會(huì)導(dǎo)致陽性信號(hào)的削弱。酶結(jié)合物在運(yùn)用前稀釋，稀釋后的酶結(jié)合物不宜長期保存，因?yàn)榈蜐舛鹊拿附Y(jié)合物極易失活。