PCR基因擴增法在“Torsch”診斷中的應用

在妊娠早期（1-3個月），有些病原微生物的感染易導致胎兒畸形，這些病原體中zui常見的有弓體、風疹病毒、單純皰疹病毒、沙眼衣原體、及巨細胞，對這幾種病原體的檢測根據(jù)其英文詞首簡稱為Torsch試驗。
 
（一）、弓形體的PCR檢測，弓形體有廣泛的自然疫原性，人體多為隱性感染，抵抗力低時可以有臨床表現(xiàn)。弓形體的診斷較困難，血清學方法敏感性較高但有交叉性出現(xiàn)假陽性而且無法確定近期感染、遠期感染或一過性感染。確診的方法是活組織檢查或動物接各，這些方法陽性率太低不能推廣。PCR檢測可以檢出樣本中1-2個病原體而且準確性高，是目前對弓形體檢測zui的方法。作為優(yōu)生優(yōu)育檢查應于妊娠前或妊娠早期取全血樣本，可以用EDTA或肝素抗凝，以EDTA抗凝效果，檢測外周血白細胞中是否有TOX存在。對于不孕，多次自然流產(chǎn)或養(yǎng)小動物的產(chǎn)期婦女，作弓形蟲檢測有更重要的臨床意義。 

（二）、單純皰診病毒，單純皰疹病毒（herpes simplex virus,HSV）是一種DNA病毒，可引起多器官的炎癥，可通過性接觸傳播。HSVⅡ感染復發(fā)率高，80%的感染者于12個月內復發(fā)。HSV感染后經(jīng)機體免疫系統(tǒng)清除，少數(shù)病人終生攜帶，體弱時復發(fā)。PCR法檢測HSV敏感性高而且可以直接對HSVⅠ/Ⅱ型進行分型鑒定。

（三）、風疹病毒感染：風疹病毒（RV）是一種單股正極性RNA病毒，人是風診病毒的*宿主。RV感染可以引起胎兒的畸形，影響胎兒免疫系統(tǒng)的發(fā)育，因此RV檢測在優(yōu)生優(yōu)育工作中顯得非常重要。RV檢測可以用直接培養(yǎng)法及IgM抗體測試法。培養(yǎng)法費時很長而且常受到其它病毒的干擾，IgM測定法結果了不太準確，PCR法敏感性及特異性都很高而且簡便快速，是RV感染zui的測試方法之一。風疹病毒侵入體內后在上呼吸道增殖而出現(xiàn)癥狀，面部出現(xiàn)丘疹，迅速遍及全身。樣本采用妊娠母親的咽部拭子、血清、產(chǎn)婦的絨毛或妊娠如羊水等。RV病毒是RNA病毒，PCR擴增較復雜，應注意樣本的采集時機，操作的準確性。

（四）、人巨細胞（HCMV），HCMV感染十分普遍，除少數(shù)原發(fā)性感染發(fā)生原發(fā)性單核細胞增多癥外，很大多數(shù)為隱性感染。HCMV可以長期潛伏在體內，當機體免疫功能低下時，病毒會激活而造成嚴重疾病在妊娠期如果孕婦感染HCMV可以引起早產(chǎn)、畸型、死胎及新生兒巨細胞包涵體病等。HCMV屬皰疹病毒科，可以從唾液、尿、宮頸分泌物及乳汁排出。HCMV“金標準”的診斷試驗是用單層成纖維細胞作病毒培養(yǎng)，其它的實驗檢查有血清學的檢測及包涵體檢測。PCR是HCMV檢測的一種新方法，用于檢測的樣本有血，生殖道分泌物拭子等，用于優(yōu)生優(yōu)育檢測時應取血樣本。對于早期妊娠病人若有HCMV感染應再檢測羊水，或其它妊娠物，對病人認真及進跟蹤檢查，綜合判斷并采取相應的醫(yī)療措施。 

（五）、沙眼衣原體，沙眼衣原體（CT）不僅能引起沙眼而且能引起生死器感染，是一種性傳播性疾病。與淋病（NG），梅毒等經(jīng)典性傳播性疾病不同，CT易經(jīng)其它接觸途徑傳播，少數(shù)地區(qū)對妊娠期婦女普查結果表明此人群中發(fā)病率高達20%-30%。在歐美等國家CT的感染已超過淋病而居性傳播性疾病。衣原體感染常呈無癥性或非特異性癥狀的隱性感染，不容易診斷。以往用培養(yǎng)法進行確診，費時且敏感性、準確性都不足。PCR用于CT檢測時應注意不同檢測目的的取材不同，對于性傳播性疾病診斷應取生殖道分泌物（查脫落細胞），而對于早期妊娠病人應查其全血樣本，在妊娠后期或臨產(chǎn)時再查陰道分泌物以便指導生育時產(chǎn)道清理。